Ensaio de viabilidade - Viability assay

Este ensaio de viabilidade plaqueado mede a viabilidade de várias leveduras através de um método denominado "frogging". A pesquisa é realizada por meio de técnicas de inoculação gota a gota. Desde então, a pesquisa foi conduzida em "tadpoling", que é uma variação de "frogging" que é concluída mantendo as células de teste diluídas em líquido durante o exame.

Um ensaio de viabilidade é um ensaio criado para determinar a capacidade de órgãos , células ou tecidos de manter ou recuperar um estado de sobrevivência. A viabilidade pode ser distinguida dos estados tudo ou nada de vida e morte pelo uso de um índice quantificável que varia entre os números inteiros de 0 e 1 ou, se mais facilmente compreendido, o intervalo de 0% e 100%. A viabilidade pode ser observada por meio das propriedades físicas das células, tecidos e órgãos. Alguns deles incluem atividade mecânica, motilidade, como com espermatozóides e granulócitos , a contração do tecido muscular ou células, atividade mitótica nas funções celulares e muito mais. Os ensaios de viabilidade fornecem uma base mais precisa para a medição do nível de vitalidade de um organismo.

Os ensaios de viabilidade podem levar a mais descobertas do que a diferença entre vivos e não vivos. Essas técnicas podem ser usadas para avaliar o sucesso das técnicas de cultura de células, técnicas de criopreservação , a toxicidade de substâncias ou a eficácia das substâncias na mitigação dos efeitos das substâncias tóxicas.

Métodos comuns

Embora técnicas visuais simples de observação da viabilidade possam ser úteis, pode ser difícil medir completamente a viabilidade de um organismo / parte de um organismo apenas usando a observação de propriedades físicas. No entanto, há uma variedade de protocolos comuns utilizados para observação adicional da viabilidade usando ensaios.

  • Redução de tetrazólio: uma maneira útil de localizar e medir a viabilidade é completar um ensaio de redução de tetrazólio. O aspecto de tetrazólio deste ensaio, que utiliza cargas positivas e negativas em sua fórmula, promove a distinção da viabilidade celular em uma amostra.
  • Redução da resazurina: os ensaios de redução da resazurina têm um desempenho muito próximo ao de um ensaio de tetrazólio, exceto que usam o poder do redox para alimentar sua capacidade de representar a viabilidade celular.
  • Marcador de viabilidade de protease: pode-se observar a função de protease em espécimes se desejar direcionar a viabilidade em células; esta prática em pesquisa é conhecida como "Conceito de Ensaio de Marcador de Viabilidade de Protease". As ações da protease cessam quando uma célula morre, então uma linha bem definida é traçada para determinar a viabilidade celular ao usar essa técnica.
  • ATP: ATP é uma molécula de energia comum sobre a qual muitos pesquisadores têm amplo conhecimento, o que leva a como se entende os ensaios de viabilidade. O conceito de ensaio de ATP é uma técnica bem conhecida para determinar a viabilidade de células usando a avaliação de ATP e um método conhecido como "luciferase do pirilampo".
  • Relação sódio-potássio: Outro tipo de ensaio pratica o exame da relação de potássio para sódio em células para servir como um indicador de viabilidade. Se as células não têm potássio intracelular alto e sódio intracelular baixo, então (1) a membrana celular pode não estar intacta e / ou (2) a bomba de sódio-potássio pode não estar funcionando bem.  
  • Actividade mitocondrial ou caspase: Resazurina e formazan ( MTT / XTT) pode ensaiar a várias fases da apoptose processo de morte celular que prefigura.
  • Genômica e proteômica: as células podem ser testadas quanto à ativação das vias de estresse usando microarrays de DNA e chips de proteína.
  • Citometria de fluxo: a automação permite a análise de milhares de células por segundo.

Como acontece com muitos tipos de ensaios de viabilidade, as medidas quantitativas da função fisiológica não indicam se a reparação e recuperação do dano é possível. Um ensaio da capacidade de uma linha celular de aderir e se dividir pode ser mais indicativo de dano incipiente do que integridade da membrana.

Frogging and tadpoling

"Frogging" é um tipo de método de ensaio de viabilidade que utiliza uma placa de ágar para o seu ambiente e consiste em plaquear diluições em série fixando-as após terem sido diluídas no líquido. Algumas de suas limitações incluem que não leva em conta a viabilidade total e não é particularmente sensível a ensaios de baixa viabilidade; no entanto, é conhecido por seu ritmo rápido. "Tadpoling", que é um método praticado após o desenvolvimento de "frogging", é semelhante ao método "frogging", mas suas células de teste são diluídas em líquido e então mantidas em líquido durante o processo de exame. O método "tadpoling" pode ser usado para medir com precisão a viabilidade da cultura, que é o que retrata sua principal separação do "frogging".

Lista de métodos de ensaio de viabilidade

Veja também

Referências

Leitura adicional