ultramicrotomia - Ultramicrotomy

Ultramicrotomia é um método para o corte em fatias espécimes extremamente finas, chamadas secções ultra-fino, que pode ser estudados e documentados em diferentes ampliações em um microscópio electrónico de transmissão (TEM). É utilizado principalmente para amostras biológicas, mas secções de plásticos e metais macios também podem ser preparados. Secções deve ser muito fina porque as 50 a 125 kV electrões do microscópio electrónico de padrão não pode passar através do material biológico muito mais espessa do que 150 nm. Para melhores resoluções, as seções deve ser de 30 a 60 nm. Este é aproximadamente o equivalente a dividir um fio de cabelo humano 0,1 milímetros de espessura em 2.000 fatias ao longo do seu diâmetro, ou o corte de uma única célula de sangue vermelho em 100 fatias.

processo ultramicrotomia

Secções ultrafinas de espécimes são cortadas usando um instrumento especial chamado um "ultramicrótomo". O ultramicrótomo está equipado com uma faca de diamante, para a maioria seccionamento biológica ultra-fino, ou uma faca de vidro, geralmente utilizado para cortes iniciais. Existem inúmeros outros equipamentos envolvidos no processo ultramicrotomia. Antes de escolher uma área do bloco da amostra a ser ultra-fina segmentado, o técnico examina cortes semifinos ou secções "grossos" variar de 0,5 a 2 um. Estas secções espessas são também conhecidos como secções de levantamento e são vistas sob um microscópio de luz para determinar se a área à direita da amostra se encontra em posição para seccionamento fino. "Ultra-fino" secções de 50 a 100 nm de espessura são capazes de ser visualizado no TEM.

Baixa ampliao de uma seco de ultra-fina (comprimento = 0,5 mm) de um megásporo de Salvinia cucullata (micrografia lente intermediária feita com o ZEISS TEM 9A - "tapete voador" preparação)

As secções de tecido obtidas por ultramicrotomia são comprimidas pela força de corte da faca. Além disso, a microscopia de interferência da superfície de corte dos blocos revela que as secções não são muitas vezes plana. Com Epon ou Vestopal como meio de inclusão os cumes e vales em geral não excedam 0,5? M em altura, ou seja, 5-10 vezes a espessura das secções normais (1).

Uma pequena amostra é retirada a partir da amostra a ser investigada. As amostras podem ser a partir de matéria biológica, tal como tecido animal ou vegetal, ou a partir de material inorgânico, tal como rocha, metal, fita magnética, plástico, filme, etc. O bloco de amostra é primeiro cortado para criar uma face bloco 1 mm até 1 mm de tamanho . Secções "grosso" (1? M) são levados a ser analisada em um microscópio óptico . Uma área é escolhido para ser seccionada por TEM e a face do bloco é re-cortado para um tamanho não maior do que 0,7 mm de lado. Bloco enfrenta geralmente têm um quadrado, trapezoidal, retangular ou triangular. Finalmente, as secções finas são cortadas com um vidro ou faca de diamante utilizando um ultramicrotomo e as secções são deixados flutuar na água, que é realizada em um barco ou calha. As secções são então recuperados a partir da superfície da água e montado sobre um cobre , níquel , ouro , ou outra rede de metal. Espessura de corte ideal para a microscopia electrónica de transmissão com voltagens de aceleração entre 50kV e 120kV é de cerca de 30-100 nm.

avanços

Cryo ultramicrótomo

Em 1952, Fernandez-Moran introduzido ultramicrotomia crio , que é uma técnica semelhante, mas feitos a baixas temperaturas entre -20 e -150 ° C. Cryo ultramicrotomia pode ser usado para cortar as amostras biológicas congelados ultra-finas. Uma das vantagens sobre o processo ultramicrotomia mais "tradicional" é a velocidade, uma vez que deverá ser possível congelar e secção de um espécime em 1 a 2 horas.

Referências