Etiqueta de proteína - Protein tag

Os marcadores de proteínas são sequências de peptídeos geneticamente enxertadas em uma proteína recombinante . Freqüentemente, essas marcas são removíveis por agentes químicos ou por meios enzimáticos, como proteólise ou splicing de inteína . As marcas são anexadas às proteínas para vários fins. Eles podem ser adicionados a qualquer uma das extremidades da proteína alvo, de modo que sejam específicos do terminal C ou do terminal N ou específicos do terminal C e do terminal N. Algumas marcas também são inseridas na sequência de codificação da proteína de interesse; eles são conhecidos como tags internas.

As etiquetas de afinidade são anexadas às proteínas para que possam ser purificadas de sua fonte biológica bruta usando uma técnica de afinidade. Estes incluem proteína de ligação de quitina (CBP), proteína de ligação de maltose (MBP), Strep-tag e glutationa-S-transferase (GST). A tag poli (His) é uma tag de proteína amplamente utilizada, que se liga a matrizes metálicas.

Marcas de solubilização são utilizadas, especialmente para proteínas recombinantes expressas em espécies deficientes em chaperonas, como E. coli , para auxiliar no dobramento adequado das proteínas e evitar que elas precipitem. Estes incluem tioredoxina (TRX) e poli (NANP). Algumas tags de afinidade têm um papel duplo como agente de solubilização, como MBP e GST.

As marcas de cromatografia são usadas para alterar as propriedades cromatográficas da proteína para permitir uma resolução diferente em uma técnica de separação particular. Freqüentemente, estes consistem em aminoácidos polianiônicos, como FLAG-tag .

Os marcadores de epítopo são sequências peptídicas curtas que são escolhidas porque os anticorpos de alta afinidade podem ser produzidos de forma confiável em muitas espécies diferentes. Geralmente são derivados de genes virais, o que explica sua alta imunorreatividade. Marcadores de epitopo incluem ALFA-tag, V5-tag , Myc-tag , HA-tag , Spot-tag , T7-tag e NE-tag . Essas marcas são particularmente úteis para experiências de western blotting , imunofluorescência e imunoprecipitação , embora também encontrem uso na purificação de anticorpos.

Etiquetas de fluorescência são usadas para fornecer leitura visual de uma proteína. GFP e suas variantes são as tags de fluorescência mais comumente usadas. Aplicações mais avançadas de GFP incluem usá-lo como um repórter dobrável (fluorescente se dobrado, incolor se não).

Os marcadores de proteína podem permitir modificação enzimática específica (como biotinilação por biotina ligase) ou modificação química (como reação com FlAsH-EDT2 para imagens de fluorescência). Freqüentemente, os marcadores são combinados, a fim de conectar proteínas a vários outros componentes. No entanto, com a adição de cada tag, existe o risco de que a função nativa da proteína seja abolida ou comprometida pelas interações com a tag. Portanto, após a purificação, os marcadores às vezes são removidos por proteólise específica (por exemplo, por protease TEV , trombina , fator Xa ou enteropeptidase ).

Lista de tags de proteína

(Consulte Aminoácido proteinogênico # Propriedades químicas para os códigos de aminoácidos AZ)

Tags de peptídeo

  • ALFA-tag , um tag de peptídeo helicoidal projetado de novo (SRLEEELRRRLTE) para aplicações bioquímicas e microscópicas. A etiqueta é reconhecida por um repertório de anticorpos de domínio único
  • AviTag, um peptídeo que permite a biotinilação pela enzima BirA e assim a proteína pode ser isolada pela estreptavidina (GLNDIFEAQKIEWHE)
  • C-tag, um peptídeo que se liga a um anticorpo camelídeo de domínio único desenvolvido por meio de exibição de fago (EPEA)
  • Tag de calmodulina , um peptídeo ligado pela proteína calmodulina (KRRWKKNFIAVSAANRFKKISSSGAL)
  • tag poliglutamato, um peptídeo que se liga de forma eficiente à resina de troca aniônica, como Mono-Q (EEEEEE)
  • tag de poliarginina, um peptídeo que se liga de forma eficiente à resina de troca catiônica (de 5 a 9 R consecutivos)
  • E-tag, um peptídeo reconhecido por um anticorpo (GAPVPYPDPLEPR)
  • FLAG-tag , um peptídeo reconhecido por um anticorpo (DYKDDDDK)
  • HA-tag , um peptídeo de hemaglutinina reconhecido por um anticorpo (YPYDVPDYA)
  • His-tag , 5-10 histidinas ligadas por um quelato de níquel ou cobalto (HHHHHH)
  • Myc-tag , um peptídeo derivado de c- myc reconhecido por um anticorpo (EQKLISEEDL)
  • NE-tag , um peptídeo sintético de 18 aminoácidos (TKENPRSNQEESYDDNES) reconhecido por um anticorpo IgG1 monoclonal, que é útil em um amplo espectro de aplicações, incluindo Western blotting, ELISA, citometria de fluxo, imunocitoquímica, imunoprecipitação e purificação por afinidade de proteínas recombinantes
  • Rho1D4-tag , refere-se aos últimos 9 aminoácidos do terminal C intracelular da rodopsina bovina (TETSQVAPA). É uma etiqueta muito específica que pode ser usada para purificação de proteínas de membrana .
  • S-tag , um peptídeo derivado de Ribonuclease A (KETAAAKFERQHMDS)
  • SBP-tag , um peptídeo que se liga a estreptavidina (MDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGQREP)
  • Softag 1 , para expressão em mamíferos (SLAELLNAGLGGS)
  • Softag 3 , para expressão procariótica (TQDPSRVG)
  • Spot-tag , um peptídeo reconhecido por um nanocorpo (PDRVRAVSHWSS) para imunoprecipitação, purificação de afinidade, imunofluorescência e microscopia de super resolução
  • Strep-tag , um peptídeo que se liga à estreptavidina ou à estreptavidina modificada chamada estreptactina (Strep-tag II: WSHPQFEK)
  • T7-tag , um epítopo tag derivado da proteína da cápside principal T7 do gene T7 (MASMTGGQQMG). Usado em diferentes imunoensaios, bem como purificação de afinidade, usado principalmente
  • Tag TC , uma tag de tetracisteína que é reconhecida pelos compostos biarsênicos FlAsH e ReAsH (CCPGCC)
  • Tag Ty (EVHTNQDPLD)
  • Tag V5 , um peptídeo reconhecido por um anticorpo (GKPIPNPLLGLDST)
  • VSV-tag, um peptídeo reconhecido por um anticorpo (YTDIEMNRLGK)
  • Tag Xpress (DLYDDDDK)

Marcadores de peptídeo covalente

  • Isopeptag , um peptídeo que se liga covalentemente à proteína pilin-C (TDKDMTITFTNKKDAE)
  • SpyTag , um péptido que se liga covalentemente a SpyCatcher proteína (AHIVMVDAYKPTK)
  • SnoopTag , um peptídeo que se liga covalentemente à proteína SnoopCatcher (KLGDIEFIKVNK). Uma segunda geração, SnoopTagJr, também foi desenvolvida para se ligar a SnoopCatcher ou DogTag (mediada por SnoopLigase) (KLGSIEFIKVNK)
  • DogTag, um peptídeo que se liga covalentemente a DogCatcher (DIPATYEFTDGKHYITNEPIPPK), e também pode se ligar covalentemente a SnoopTagJr, mediado por SnoopLigase
  • SdyTag, um peptídeo que se liga covalentemente à proteína SdyCatcher (DPIVMIDNDKPIT). SdyTag / SdyCatcher tem uma reatividade cruzada dependente da cinética com SpyTag / SpyCatcher.

Etiquetas de proteína

Outros

HiBiT-tag foi desenvolvido por cientistas da Promega. É um marcador de peptídeo de 11 aminoácidos e pode ser fundido ao terminal N ou C ou a localizações internas de proteínas. Seu tamanho pequeno leva a um rápido knock-in desta tag com outras proteínas que interessam às pessoas através da tecnologia CRISPR / Cas9.

Formulários

Referências