Etest - Etest
Etest (anteriormente conhecido como teste Epsilômetro ) é uma forma de determinar a sensibilidade antimicrobiana colocando uma tira impregnada com antimicrobianos em uma placa de ágar . Uma cepa de bactéria ou fungo não cresce perto de uma concentração de antibiótico ou antifúngico se for sensível. Para algumas combinações microbianas e antimicrobianas, os resultados podem ser usados para determinar uma concentração inibitória mínima (MIC). Etest é um sistema proprietário fabricado pela bioMérieux . É um teste de laboratório usado em ambientes de saúde para ajudar a orientar os médicos, indicando qual concentração de antimicrobiano poderia ser usada com sucesso para tratar infecções de pacientes.
Usar
Etest é uma técnica quantitativa para determinar a sensibilidade aos antibióticos e a concentração inibitória mínima (em µg / mL) de algumas bactérias, incluindo bactérias aeróbias Gram-negativas e Gram-positivas, como Enterobacteriaceae , Pseudomonas , Burkholderia , Staphylococcus e espécies de Enterococcus e bactérias exigentes, tais como espécies anaeróbias, N. gonorrhoeae , S. pneumoniae , Streptococcus e Haemophilius . Também pode ser usado para determinar MICs contra certos fungos.
Procedimento
Etest é uma tira reagente de plástico não poroso pré-preparada com um gradiente predefinido de antibiótico, cobrindo uma faixa de concentração contínua. É aplicado na superfície de uma placa de ágar inoculada com a cepa teste, onde há liberação do gradiente antimicrobiano do portador de plástico para o ágar para formar um gradiente estável e contínuo abaixo e nas proximidades da tira.
O tempo que leva para uma placa ficar pronta depende da bactéria que está sendo testada e das condições da placa de ágar. O gradiente de Etest predefinido permanece estável por pelo menos 18 a 24 horas; isto é, um período que cobre os tempos críticos de muitas espécies de organismos fastidiosos e não fastidiosos.
Após o teste, o crescimento bacteriano se torna visível após a incubação e uma elipse de inibição simétrica centrada ao longo da tira é vista. O valor MIC é lido na escala em termos de µg / mL, onde a borda da elipse intercepta a tira. Após o período de incubação necessário, o valor inibitório mínimo é lido onde a borda da elipse de inibição intercepta o lado da tira. A placa não deve ser lida se a cultura parecer misturada ou se o gramado de crescimento for muito leve ou muito pesado.
Os desfechos do Etest MIC são geralmente bem definidos, embora diferentes padrões de crescimento / inibição possam ser observados dependendo do antifúngico ou antibiótico usado.
Seleção de meio ágar
O Etest pode ser usado com muitos tipos diferentes de meio de ágar AST, desde que o meio suporte um bom crescimento do organismo de teste e não interfira com a atividade do agente antimicrobiano. No entanto, para maximizar a reprodutibilidade, o meio escolhido deve cumprir os requisitos básicos para um meio de teste de suscetibilidade. As seguintes mídias AST são recomendadas para uso com Etest:
- Aeróbios: ágar Mueller Hinton, como MHE (bioMérieux)
- Anaeróbios: ágar sangue Brucella com suplementos apropriados
Esses meios podem requerer nutrientes suplementares para obter um maior crescimento de organismos nutricionalmente exigentes, como pneumococos, estreptococos, Abiotrophia , Haemophilus , gonococos, meningococos e Campylobacter . Em geral, as recomendações da mídia do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) e do Comitê Europeu de Testes de Suscetibilidade Antimicrobiana (EUCAST) são consideradas adequadas para o Etest.
Disponibilidade
Produtos Etest para mais de 100 agentes antimicrobianos, incluindo antibióticos, agentes antifúngicos e agentes antimicobacterianos estão disponíveis. Além disso, produtos específicos do Etest estão disponíveis para a detecção de mecanismos de resistência específicos [por exemplo, ESBL (Extended Spectrum Beta-Lactamase), MBL (Metallo Beta-Lactamase), AmpC Beta-Lactamase e VISA / h VISA].
O Etest foi liberado pelo FDA e marcado pela CE para muitos organismos em comparação aos métodos convencionais de referência de diluição em caldo / ágar e demonstrou ter uma correlação excelente.
Equipamento Etest
A família de instrumentos Etest foi projetada para simplificar o uso diário do Etest. Simplex C76, Nema C88 e Retro C80 são fáceis de usar, reduzindo a fadiga do operador, economizando tempo e melhorando a qualidade dos resultados, aumentando a reprodutibilidade. Etest e instrumentos relacionados oferecem um dos métodos mais eficientes para gerar valores de MIC em escala em 15 diluições duplas para testes de suscetibilidade de uma ampla gama de combinações de drogas e insetos, incluindo organismos exigentes.
- O Simplex C76 automatiza a colocação de 1 a 6 tiras Etest diferentes para simplificar a configuração dos painéis MIC. A aplicação de até 6 tiras em placas de ágar grandes ou de até 2 tiras em placas pequenas leva <12 segundos.
- Retro C80 é um rotador rotativo que simplifica e padroniza a inoculação de placas de ágar pequenas e grandes, tornando o Etest® mais fácil de ler quando comparado ao espalhamento manual.
- Nema C88 é uma caneta a vácuo que simplifica a aplicação das tiras Etest®. O aplicador é segurado como uma caneta e o orifício de evacuação é coberto com a ponta do dedo para criar sucção. A ventosa é colocada na tira para levantá-la e posicioná-la na superfície do ágar. A tira é liberada removendo a ponta do dedo do orifício de evacuação.
História
A tira de Etest foi descrita pela primeira vez em 1988 e foi introduzida comercialmente em 1991 pela AB BIODISK. A bioMérieux adquiriu a AB BIODISK em 2008 e continua a fabricar e comercializar esta linha de produtos sob a marca Etest.
Durante a década de 1950, Hans Ericsson (Professor de microbiologia no Hospital Karolinska e Instituto Karolinska, Estocolmo), o fundador científico da AB BIODISK, desenvolveu um método para padronizar o teste de difusão em disco e para melhorar sua reprodutibilidade e confiabilidade para previsões de suscetibilidade clínica. Os tamanhos da zona de inibição dos resultados do teste de disco foram comparados com os valores da concentração inibitória mínima (MIC) com base no procedimento de diluição do ágar de referência . A correlação entre os tamanhos das zonas e os valores de MIC foi então avaliada por meio de análise de regressão e as linhas de regressão foram usadas para extrapolar os limites interpretativos da zona que correspondiam aos valores do ponto de quebra de MIC que definiam os resultados categóricos suscetíveis, intermediários e resistentes.
O Etest foi apresentado pela primeira vez na Conferência de Intersciência sobre Agentes Antimicrobianos e Quimioterapia (ICAAC) em Los Angeles em 1988 como um novo conceito de gradiente para determinações de MIC. Em setembro de 1991, o Etest foi lançado globalmente como um produto MIC após receber a autorização da USA Food and Drug Administration (FDA).
Veja também
Referências