Aloficocianina - Allophycocyanin
Aloficocianina ("outra proteína azul de algas"; do grego : ἄλλος (allos) que significa "outro", φύκος (phykos) que significa "alga" e κυανός (kyanos) que significa "azul") é uma proteína da família da ficobiliproteína que coleta luz , junto com ficocianina , ficoeritrina e ficoeritrocianina . É um pigmento acessório à clorofila . Todas as ficobiliproteínas são solúveis em água e, portanto, não podem existir dentro da membrana como os carotenóides , mas se agregam, formando aglomerados que aderem à membrana chamados ficobilissomos . A aloficocianina absorve e emite luz vermelha (650 e 660 nm máx, respectivamente) e é facilmente encontrada em cianobactérias (também chamadas de algas verde-azuladas ) e algas vermelhas . Pigmentos de ficobilina têm propriedades fluorescentes que são usadas em kits de imunoensaio . Na citometria de fluxo , é frequentemente abreviado APC. Para ser usado com eficácia em aplicações como FACS , High-Throughput Screening (HTS) e microscopia , o APC precisa ser quimicamente reticulado.
Características estruturais
A aloficocianina pode ser isolada de várias espécies de algas vermelhas ou azul-esverdeadas, cada uma produzindo formas ligeiramente diferentes da molécula. É composto por duas subunidades diferentes (α e β) em que cada subunidade possui um cromóforo de ficocianobilina (PCB). A estrutura da subunidade para APC foi determinada como (αβ) 3 . O peso molecular do APC é 105.000 Daltons.
Características espectrais
| Absorção máxima | 652 nm |
| Pico de absorção adicional | 625 nm |
| Emissão máxima | 657,5 nm |
| Stokes Shift | 5,5 nm |
| Coeficiente de extinção | 700.000 M −1 cm −1 |
| Rendimento Quântico | 0,68 |
| Brilho | 1,6 x 10 5 M −1 cm −1 |
APC reticulado
Como mencionado acima, para que o APC seja útil em imunoensaios, ele deve primeiro ser reticulado quimicamente para evitar que se dissocie em suas subunidades componentes quando em tampões fisiológicos comuns. O método convencional para conseguir isso é através de um processo destrutivo em que o trímero APC tratado é quimicamente rompido em ureia 8 M e, em seguida, permitido se reassociar em um tampão fisiológico. Um método alternativo pode ser usado que preserva a integridade estrutural do trímero APC e permite um produto final mais brilhante e estável.
Formulários
Muitas aplicações e instrumentos foram desenvolvidos especificamente para Aloficocianina. É comumente usado em imunoensaios como FACS , citometria de fluxo e triagem de alto rendimento como um aceitador para Európio por meio de ensaios de transferência de energia por ressonância de fluorescência resolvida por tempo (TR-FRET) .