Cromatografia líquida - espectrometria de massa - Liquid chromatography–mass spectrometry

Cromatografia líquida - espectrometria de massa
Bruker Amazon Speed ​​ETD
Sistema LCMS de armadilha de íons com interface ESI
Acrônimo LCMS
Classificação Espectrometria de massa de cromatografia
Analitos biomoléculas de moléculas orgânicas
Fabricantes Agilent
Bruker
PerkinElmer
SCIEX
Shimadzu Scientific
Thermo Fisher Scientific
Waters Corporation
Outras técnicas
Relacionado Cromatografia gasosa - espectrometria de massa

A cromatografia líquida-espectrometria de massa ( LC-MS ) é uma técnica de química analítica que combina os recursos de separação física da cromatografia líquida (ou HPLC ) com os recursos de análise de massa da espectrometria de massa (MS). Cromatografia acoplada - os sistemas MS são populares em análises químicas porque as capacidades individuais de cada técnica são aprimoradas de forma sinérgica. Enquanto a cromatografia líquida separa as misturas com vários componentes, a espectrometria de massa fornece identidade estrutural dos componentes individuais com alta especificidade molecular e sensibilidade de detecção. Esta técnica em tandem pode ser usada para analisar compostos bioquímicos, orgânicos e inorgânicos comumente encontrados em amostras complexas de origem ambiental e biológica. Portanto, LC-MS pode ser aplicado em uma vasta gama de sectores, incluindo biotecnologia , monitorização ambiente, processamento de alimentos , e farmacêutica , agroquímica , e cosméticos indústrias.

Além dos dispositivos de cromatografia líquida e espectrometria de massa, um sistema LC-MS contém uma interface que transfere com eficiência os componentes separados da coluna LC para a fonte de íons MS. A interface é necessária porque os dispositivos LC e MS são fundamentalmente incompatíveis. Embora a fase móvel em um sistema LC seja um líquido pressurizado, os analisadores MS geralmente operam sob alto vácuo (cerca de 10 -6 Torr / 10 -7 "Hg ). Assim, não é possível bombear diretamente o eluato da coluna LC na fonte de MS. No geral, a interface é uma parte mecanicamente simples do sistema LC-MS que transfere a quantidade máxima de analito, remove uma porção significativa da fase móvel usada em LC e preserva a identidade química dos produtos de cromatografia (quimicamente inerte). Como requisito, a interface não deve interferir na eficiência de ionização e nas condições de vácuo do sistema MS. Hoje em dia, as interfaces LC-MS mais amplamente aplicadas são baseadas em estratégias de ionização de pressão atmosférica (API), como ionização por eletrospray (ESI), ionização química por pressão atmosférica (APCI) e fotoionização por pressão atmosférica (APPI). Essas interfaces tornaram-se disponíveis na década de 1990, após um processo de pesquisa e desenvolvimento de duas décadas.

História da LC-MS

O acoplamento de cromatografia com MS é uma estratégia de análise química bem desenvolvida que data da década de 1950. A cromatografia gasosa (GC) - MS foi originalmente introduzida em 1952, quando AT James e AJP Martin estavam tentando desenvolver técnicas de separação em tandem - análise de massa. No GC, os analitos são eluídos da coluna de separação como um gás e a conexão com fontes de íons de ionização de elétrons ( EI ) ou ionização química ( CI ) no sistema MS foi um desafio tecnicamente mais simples. Por causa disso, o desenvolvimento de sistemas GC-MS foi mais rápido do que LC-MS e esses sistemas foram comercializados pela primeira vez na década de 1970. O desenvolvimento de sistemas LC-MS demorou mais do que GC-MS e estava diretamente relacionado ao desenvolvimento de interfaces adequadas. VL Tal'roze e colaboradores começaram o desenvolvimento do LC-MS no início dos anos 1970, quando usaram capilares pela primeira vez para conectar colunas LC e fontes de íons MS. Uma estratégia semelhante foi investigada por McLafferty e colaboradores em 1973. Esta foi a primeira e mais óbvia maneira de acoplar LC com MS e era conhecida como interface de entrada capilar. Esta interface pioneira para LC-MS tinha as mesmas capacidades de análise do GC-MS e era limitada a analitos bastante voláteis e compostos não polares com baixa massa molecular (abaixo de 400 Da). Na interface de entrada do capilar, a evaporação da fase móvel dentro do capilar foi um dos principais problemas. Nos primeiros anos de desenvolvimento do LC-MS, alternativas on-line e off-line foram propostas como alternativas de acoplamento. Em geral, o acoplamento off-line envolveu coleta de fração, evaporação de solvente e transferência de analitos para o MS usando sondas. O processo de tratamento de analito off-line era demorado e havia um risco inerente de contaminação da amostra. Rapidamente, percebeu-se que a análise de misturas complexas exigiria o desenvolvimento de uma solução de acoplamento on-line totalmente automatizada em LC-MS.

Interface de esteira móvel

A interface de correia móvel (MBI) foi desenvolvida em 1977. Essa interface consistia em uma correia móvel sem fim recebendo o efluente da coluna LC. Na correia, o solvente foi evaporado por aquecimento suave e exaustão eficiente dos vapores do solvente sob pressão reduzida em duas câmaras de vácuo. Após a remoção da fase líquida, os analitos seriam dessorvidos da correia e migrariam para a fonte de íons MS para serem analisados. MBI foi usado com sucesso para aplicações LC-MS entre 1978 e 1990 porque permitiu o acoplamento de LC a dispositivos MS usando EI, CI e fontes de íons de bombardeamento de átomo rápido (FAB). Os sistemas MS mais comuns conectados por interfaces MBI a colunas LC eram instrumentos de setor magnético e quadropolo . As interfaces MBI para LC-MS permitiram que o MS fosse amplamente aplicado na análise de drogas, pesticidas, esteróides, alcalóides e hidrocarbonetos aromáticos policíclicos . Esta interface deixou de ser utilizada devido à sua complexidade mecânica e às dificuldades associadas à renovação da correia. As interfaces de feixe de partículas assumiram as amplas aplicações da MBI para LC-MS em 1988.

Interface de introdução direta de líquido

A interface de introdução direta de líquido (DLI) foi desenvolvida em 1980. Essa interface foi pensada como uma solução para a evaporação de líquido dentro da interface de entrada capilar. No DLI, um nebulizador foi usado para desintegrar parte do efluente proveniente da coluna. Um pequeno diafragma foi usado para formar um jato líquido composto de pequenas gotículas que foram posteriormente secas em uma câmara de dessolvatação. Uma coluna capilar microbore foi usada para transferir o produto líquido nebulizado para a fonte de íons MS. Os analitos foram ionizados usando uma fonte de ionização química assistida por solvente, onde os solventes LC atuaram como gases reagentes. Para usar essa interface, foi necessário dividir o fluxo que sai da coluna LC porque apenas uma pequena porção do efluente (10 a 50 μl / min de 1 ml / min) pode ser analisada on-line sem quebrar o MS vácuo. Um dos principais problemas operacionais da interface DLI era o frequente entupimento dos orifícios do diafragma. A interface DLI foi usada entre 1982 e 1985 para a análise de pesticidas, corticosteroides, metabólitos na urina de cavalo, eritromicina e vitamina B 12 . No entanto, essa interface foi substituída pela interface termopulverização, que removeu as limitações da taxa de fluxo e os problemas com os diafragmas de entupimento.

Interface Thermospray

A interface thermospray (TSP) foi desenvolvida em 1983 pelos laboratórios Vestal da Universidade de Houston. A interface resultou de um projeto de pesquisa de longo prazo com o objetivo de encontrar uma interface LC-MS capaz de lidar com altas taxas de fluxo (1 ml / min) e evitar a divisão de fluxo em interfaces DLI. A interface TSP era composta por uma sonda aquecida, uma câmara de dessolvatação e um skimmer de troca iônica. O efluente LC passou pela sonda aquecida e emergiu como um jato de vapor e pequenas gotas fluindo para a câmara de dessolvatação a baixa pressão. A ionização dos solutos ocorreu por evaporação direta ou reações íon-molécula induzidas pelo solvente. Essa interface era capaz de lidar com até 2 ml / min de eluato da coluna LC e o introduziria com eficiência no sistema de vácuo MS. O TSP também foi mais adequado para aplicações LC-MS envolvendo cromatografia líquida de fase reversa (RT-LC). O sistema TSP tinha uma função dupla atuando como uma interface e uma fonte de ionização química mediada por solvente. Com o tempo, a complexidade mecânica do TSP foi simplificada e essa interface se tornou popular como a primeira interface LC-MS ideal para aplicações farmacêuticas que compreendem a análise de drogas , metabólitos, conjugados, nucleosídeos , peptídeos , produtos naturais e pesticidas . A introdução do TSP marcou uma melhoria significativa para os sistemas LC-MS e foi a interface mais amplamente aplicada até o início da década de 1990, quando começou a ser substituída por interfaces envolvendo ionização por pressão atmosférica (API).

Interfaces baseadas em FAB

As interfaces de frita FAB e fluxo contínuo-FAB (CF-FAB) foram desenvolvidas em 1985 e 1986, respectivamente. Ambas as interfaces eram semelhantes, mas diferiam porque a primeira usava uma sonda de frita porosa como canal de conexão, enquanto o CF-FAB usava uma ponta de sonda. Destes, o CF-FAB foi mais bem sucedido como uma interface LC-MS e foi útil para analisar compostos não voláteis e termicamente lábeis. Nessas interfaces, o efluente LC passou pelos canais de frita ou CF-FAB para formar um filme líquido uniforme na ponta. Lá, o líquido foi bombardeado com feixes de íons ou átomos de alta energia (átomo rápido). Para uma operação estável, as interfaces baseadas em FAB eram capazes de lidar com taxas de fluxo de líquido de apenas 1–15 μl e também eram restritas a microbore e colunas capilares. Para serem usados ​​em fontes de ionização FAB MS, os analitos de interesse devem ser misturados com uma matriz (por exemplo, glicerol) que pode ser adicionada antes ou depois da separação na coluna LC. As interfaces baseadas em FAB foram amplamente utilizadas para caracterizar peptídeos, mas perderam a aplicabilidade com o advento das interfaces baseadas em electrospray em 1988.

Cromatografia liquida

Diagrama de um sistema LC-MS

A cromatografia líquida é um método de separação física em que os componentes de uma mistura líquida são distribuídos entre duas fases imiscíveis, ou seja, estacionária e móvel. A prática de LC pode ser dividida em cinco categorias, ou seja, cromatografia de adsorção , cromatografia de partição , cromatografia de troca iônica , cromatografia de exclusão de tamanho e cromatografia de afinidade . Entre eles, a variante mais utilizada é o modo de fase reversa (RP) da técnica de cromatografia de partição, que faz uso de uma fase estacionária não polar (hidrofóbica) e uma fase móvel polar. Em aplicações comuns, a fase móvel é uma mistura de água e outros solventes polares (por exemplo, metanol, isopropanol e acetonitrila), e a matriz estacionária é preparada ligando grupos alquil de cadeia longa (por exemplo, n-octadecil ou C 18 ) à superfície de partículas de sílica de formato irregular ou esférico com 5 μm de diâmetro.

Em HPLC, normalmente 20 μl da amostra de interesse são injetados na corrente de fase móvel fornecida por uma bomba de alta pressão. A fase móvel contendo os analitos permeia através do leito da fase estacionária em uma direção definida. Os componentes da mistura são separados em função de sua afinidade química com as fases móvel e estacionária. A separação ocorre após repetidas etapas de sorção e dessorção que ocorrem quando o líquido interage com o leito estacionário. O solvente líquido (fase móvel) é fornecido sob alta pressão (até 400 bar ou 300.000 torr) em uma coluna empacotada contendo a fase estacionária. A alta pressão é necessária para atingir uma taxa de fluxo constante para experimentos de cromatografia reproduzíveis. Dependendo da partição entre as fases móvel e estacionária, os componentes da amostra fluirão para fora da coluna em momentos diferentes. A coluna é o componente mais importante do sistema LC e foi projetada para suportar a alta pressão do líquido. As colunas LC convencionais têm 100–300 mm de comprimento com diâmetro externo de 6,4 mm (1/4 pol.) E diâmetro interno de 3,0 - 4,6 mm. Para aplicações envolvendo LC-MS, o comprimento das colunas de cromatografia pode ser menor (30–50 mm) com partículas de empacotamento de 3–5 μm de diâmetro. Além do modelo convencional, outras colunas LC são os modelos de furo estreito, micro-furo, microcapilar e nano-LC. Essas colunas têm diâmetros internos menores, permitem uma separação mais eficiente e lidam com fluxos de líquidos abaixo de 1 ml / min (a taxa de fluxo convencional). Para melhorar a eficiência de separação e a resolução de pico, a cromatografia líquida de ultra desempenho (UPLC) pode ser usada em vez de HPLC. Esta variante LC usa colunas compactadas com partículas menores de sílica (~ 1,7 μm de diâmetro) e requer pressões operacionais mais altas na faixa de 310.000 a 775.000 torr (6.000 a 15.000 psi).

Espectrometria de massa

Espectro LC-MS de cada pico resolvido

A espectrometria de massa (MS) é uma técnica analítica que mede a relação massa-carga ( m / z) de partículas carregadas (íons). Embora existam muitos tipos diferentes de espectrômetros de massa, todos eles fazem uso de campos elétricos ou magnéticos para manipular o movimento de íons produzidos a partir de um analito de interesse e determinar seus m / z. Os componentes básicos de um espectrômetro de massa são a fonte de íons , o analisador de massa , o detector e os sistemas de dados e vácuo. A fonte de íons é onde os componentes de uma amostra introduzida em um sistema MS são ionizados por meio de feixes de elétrons , feixes de fótons ( luzes UV ), feixes de laser ou descarga corona . No caso da ionização por eletrospray, a fonte de íons move os íons que existem na solução líquida para a fase gasosa. A fonte de íons converte e fragmenta as moléculas neutras da amostra em íons de fase gasosa que são enviados ao analisador de massa. Enquanto o analisador de massa aplica os campos elétricos e magnéticos para classificar os íons por suas massas, o detector mede e amplifica a corrente de íons para calcular as abundâncias de cada íon resolvido por massa. Para gerar um espectro de massa que o olho humano possa reconhecer facilmente, o sistema de dados registra, processa, armazena e exibe os dados em um computador.

O espectro de massa pode ser usado para determinar a massa dos analitos, sua composição elementar e isotópica, ou para elucidar a estrutura química da amostra. MS é um experimento que deve ocorrer em fase gasosa e sob vácuo (1,33 * 10 −2 a 1,33 * 10 −6 pascal). Portanto, o desenvolvimento de dispositivos que facilitem a transição de amostras em alta pressão e em fase condensada (sólida ou líquida) para um sistema a vácuo tem sido essencial para o desenvolvimento do MS como uma ferramenta potente para identificação e quantificação de compostos orgânicos como peptídeos. O MS é agora muito usado em laboratórios analíticos que estudam propriedades físicas, químicas ou biológicas de uma grande variedade de compostos. Entre os diversos tipos de analisadores de massa, os que encontram aplicação em sistemas LC-MS são os analisadores quadrupolo , tempo de vôo (TOF) , armadilhas de íons e quadrupolo-TOF híbrido (QTOF) .

Interfaces

A interface entre uma técnica de fase líquida (HPLC) com um eluato de fluxo contínuo e uma técnica de fase gasosa realizada no vácuo foi difícil por um longo tempo. O advento da ionização por eletrospray mudou isso. Atualmente, as interfaces LC-MS mais comuns são ionização por eletrospray (ESI), ionização química por pressão atmosférica (APCI) e fotoionização por pressão atmosférica (APPI). Estas são fontes de íons MS mais recentes que facilitam a transição de um ambiente de alta pressão (HPLC) para condições de alto vácuo necessárias no analisador MS. Embora essas interfaces sejam descritas individualmente, elas também podem estar disponíveis comercialmente como fontes duplas de íons ESI / APCI, ESI / APPI ou APCI / APPI. Várias técnicas de deposição e secagem foram usadas no passado (por exemplo, correias móveis), mas a mais comum delas era a deposição MALDI off-line . Uma nova abordagem ainda em desenvolvimento, chamada interface EI LC-MS direta , acopla um sistema nano HPLC e um espectrômetro de massa equipado com ionização de elétrons.

Ionização por eletropulverização (ESI)

A interface ESI para sistemas LC-MS foi desenvolvida por Fenn e colaboradores em 1988. Esta fonte / interface de íons pode ser usada para a análise de moléculas moderadamente polares (por exemplo, metabólitos, xenobióticos e peptídeos). O eluato líquido que sai da coluna LC é bombeado através de um capilar metálico mantido entre 3 e 5 kV. O líquido é nebulizado na ponta do capilar e um spray fino de gotículas carregadas é formado. Para evitar contaminação, esse capilar está geralmente localizado perpendicularmente na entrada do sistema MS. O calor gerado pelo potencial elétrico é usado para evaporar rapidamente as gotículas em uma atmosfera de nitrogênio seco. Posteriormente, os analitos ionizados são transferidos para a câmara de alto vácuo do MS à medida que os íons carregados fluem através de uma série de pequenas aberturas com o auxílio de voltagens de foco. Íons carregados positiva e negativamente podem ser detectados e é possível alternar entre os modos de operação negativo e positivo. A maioria dos íons produzidos na interface ESI tem carga múltipla. O uso de colunas de microbore de 1–3 mm ID é recomendado para sistemas LC-MS usando interfaces de ionização por electrospray (ESI) porque a operação ideal é alcançada com taxas de fluxo na faixa de 50-200 μl / min.

Ionização química à pressão atmosférica (APCI)

O desenvolvimento da interface APCI para LC-MS começou com Horning e colaboradores no início de 1973. No entanto, sua aplicação comercial foi introduzida no início da década de 1990 depois que Henion e colaboradores aprimoraram a interface LC-APCI-MS em 1986. O APCI A fonte / interface de íons pode ser usada para analisar moléculas pequenas, neutras, relativamente não polares e termicamente estáveis ​​(por exemplo, esteróides, lipídios e vitaminas solúveis em gordura). Esses compostos não são bem ionizados usando ESI. Além disso, o APCI também pode lidar com fluxos de fase móvel contendo agentes de buffer. O líquido do sistema LC é bombeado por um capilar e também há nebulização na ponta, onde ocorre uma descarga corona. Em primeiro lugar, o gás ionizante em torno da interface e o solvente da fase móvel estão sujeitos à ionização química na fonte de íons. Posteriormente, esses íons reagem com o analito e transferem sua carga. Os íons da amostra, então, passam por pequenos escumadores de orifício por meio de lentes de foco de íons ou. Uma vez dentro da região de alto vácuo, os íons são sujeitos à análise de massa. Esta interface pode ser operada em modos de carga positiva e negativa e íons com carga única são produzidos principalmente. A fonte de íons APCI também pode lidar com taxas de fluxo entre 500 e 2.000 μl / min e pode ser conectada diretamente a colunas convencionais de 4,6 mm ID.

Fotoionização por pressão atmosférica (APPI)

A interface APPI para LC-MS foi desenvolvida simultaneamente por Bruins e Syage em 2000. APPI é outra fonte / interface de íons LC-MS para a análise de compostos neutros que não podem ser ionizados usando ESI. Essa interface é semelhante à fonte de íons APCI, mas em vez de uma descarga corona, a ionização ocorre usando fótons vindos de uma lâmpada de descarga. No modo APPI direto, íons moleculares de analito com carga única são formados pela absorção de um fóton e ejeção de um elétron. No modo dopante-APPI, um composto facilmente ionizável (Dopante) é adicionado à fase móvel ou o gás nebulizador para promover uma reação de troca de carga entre o íon molecular dopante e o analito. A amostra ionizada é posteriormente transferida para o analisador de massa em alto vácuo à medida que passa por pequenos escumadores de orifício.

Formulários

O acoplamento de sistemas MS com LC é atraente porque a cromatografia líquida pode separar misturas naturais delicadas e complexas, cuja composição química precisa ser bem estabelecida (por exemplo, fluidos biológicos, amostras ambientais e medicamentos). Além disso, o LC-MS tem aplicações na análise de resíduos explosivos voláteis. Hoje em dia, o LC-MS se tornou uma das técnicas de análise química mais amplamente utilizadas porque mais de 85% dos compostos químicos naturais são polares e termicamente lábeis e o GC-MS não pode processar essas amostras. Como exemplo, o HPLC-MS é considerado a técnica analítica líder para laboratórios de proteômica e farmacêuticos. Outras aplicações importantes do LC-MS incluem a análise de alimentos, pesticidas e fenóis vegetais .

Farmacocinética

LC-MS é amplamente utilizado no campo da bioanálise e está especialmente envolvido em estudos farmacocinéticos de produtos farmacêuticos. Estudos farmacocinéticos são necessários para determinar a rapidez com que um medicamento será eliminado dos órgãos do corpo e do fluxo sanguíneo hepático. Os analisadores MS são úteis nesses estudos por causa de seu tempo de análise mais curto e maior sensibilidade e especificidade em comparação com detectores de UV comumente acoplados a sistemas de HPLC. Uma grande vantagem é o uso de tandem MS-MS , onde o detector pode ser programado para selecionar certos íons para fragmentar. A quantidade medida é a soma dos fragmentos de moléculas escolhidos pelo operador. Contanto que não haja interferências ou supressão de íons em LC-MS , a separação de LC pode ser bastante rápida.

Proteômica / metabolômica

LC-MS é usado em proteômica como um método para detectar e identificar os componentes de uma mistura complexa. A abordagem proteômica de LC-MS de baixo para cima geralmente envolve digestão e desnaturação por protease usando tripsina como protease, ureia para desnaturar a estrutura terciária e iodoacetamida para modificar os resíduos de cisteína. Após a digestão, LC-MS é usado para impressão digital de massa de peptídeo , ou LC-MS / MS (tandem MS) é usado para derivar as sequências de peptídeos individuais. LC-MS / MS é mais comumente usado para análise proteômica de amostras complexas onde as massas de peptídeos podem se sobrepor, mesmo com uma espectrometria de massa de alta resolução. Amostras de complexos biológicos (por exemplo, soro humano) podem ser analisadas em sistemas LC-MS / MS modernos, que podem identificar mais de 1000 proteínas. No entanto, esse alto nível de identificação de proteínas só é possível após a separação da amostra por meio de gel SDS-PAGE ou HPLC-SCX. Recentemente, LC-MS / MS foi aplicado para pesquisar biomarcadores de peptídeos. Um exemplo é a recente descoberta e validação de biomarcadores de peptídeos para quatro principais patógenos bacterianos do trato respiratório ( Staphylococcus aureus , Moraxella catarrhalis ; Haemophilus influenzae e Streptococcus pneumoniae ).

LC-MS emergiu como uma das técnicas mais comumente usadas no perfil metabólico global do tecido biológico (por exemplo, plasma sanguíneo, soro, urina). LC-MS também é usado para a análise de produtos naturais e o perfil de metabólitos secundários em plantas. A este respeito, os sistemas baseados em MS são úteis para adquirir informações mais detalhadas sobre o amplo espectro de compostos de amostras biológicas complexas. A ressonância magnética nuclear de LC ( NMR ) também é usada na metabolômica de plantas, mas esta técnica só pode detectar e quantificar os metabólitos mais abundantes. LC-MS tem sido útil para o avanço do campo da metabolômica vegetal, que visa estudar o sistema vegetal em nível molecular, fornecendo uma caracterização não tendenciosa do metaboloma da planta em resposta ao seu ambiente. A primeira aplicação de LC-MS em metabolômica de plantas foi a detecção de uma ampla gama de metabólitos altamente polares, oligossacarídeos , aminoácidos , amino açúcares e nucleotídeos de açúcar em tecidos de floema de Cucurbita maxima . Outro exemplo de LC-MS em metabolômica vegetal é a separação e identificação eficiente de glicose , sacarose , rafinose , estaquiose e verbascose de extratos de folhas de Arabidopsis thaliana .

Desenvolvimento de drogas

LC-MS é frequentemente usado no desenvolvimento de medicamentos porque permite a confirmação rápida do peso molecular e identificação da estrutura. Esses recursos aceleram o processo de geração, teste e validação de uma descoberta a partir de uma vasta gama de produtos com potencial aplicação. As aplicações de LC-MS para desenvolvimento de drogas são métodos altamente automatizados usados ​​para mapeamento de peptídeos, mapeamento de glicoproteínas , lipodômicos, desreplicação de produtos naturais, triagem de bioafinidade, triagem de drogas in vivo , triagem de estabilidade metabólica, identificação de metabólitos, identificação de impurezas, bioanálise quantitativa e controle de qualidade.

Veja também

Referências

Leitura adicional

  • Thurman, EM; Ferrer, Imma (2003). Cromatografia líquida / espectrometria de massa, MS / MS e tempo de vôo MS: análise de contaminantes emergentes . Columbus, OH: American Chemical Society. ISBN 978-0-8412-3825-1.
  • Ferrer, Imma; Thurman, EM (2009). Cromatografia líquida - Espectrometria de Massa de Tempo de Voo: Princípios, Ferramentas e Aplicações para Análise Exata de Massa . Nova York, NJ: Wiley. ISBN 978-0-470-13797-0.
  • McMaster, Marvin C. (2005). LC / MS: um guia prático do usuário . Nova York: John Wiley. ISBN 978-0-471-65531-2.
  • Yergey, Alfred L. (1990). Cromatografia líquida / espectrometria de massa: técnicas e aplicações . Nova York: Plenum Press. ISBN 978-0-306-43186-9.