Histopatologia - Histopathology

Micrografia mostrando necrose da banda de contração , um achado histopatológico de infarto do miocárdio (ataque cardíaco).

Histopatologia (composto de três palavras gregas : ἱστός histos "tecido", πάθος pathos "sofrimento" e -λογία -logia "estudo de") refere-se ao exame microscópico do tecido para estudar as manifestações da doença . Especificamente, na medicina clínica, histopatologia se refere ao exame de uma biópsia ou espécime cirúrgico por um patologista , após o espécime ter sido processado e os cortes histológicos colocados em lâminas de vidro. Em contraste, a citopatologia examina células livres ou microfragmentos de tecido (como "blocos de células").

Coleção de tecidos

O exame histopatológico dos tecidos começa com cirurgia , biópsia ou autópsia . O tecido é removido do corpo ou da planta e, em seguida, geralmente após uma dissecção especializada no estado fresco, colocado em um fixador que estabiliza os tecidos para evitar a deterioração . O fixador mais comum é a formalina ( formaldeído tamponado neutro a 10% em água).

Preparação para histologia

Itens usados ​​para enviar as amostras: envoltório (biópsia), esponja (biópsia), cassete (processamento de tecido) e bolsa (biópsia).

O tecido é então preparado para visualização ao microscópio usando fixação química ou corte congelado.

Se uma grande amostra for fornecida, por exemplo, de um procedimento cirúrgico, um patologista examina a amostra de tecido e seleciona a parte com maior probabilidade de produzir um diagnóstico útil e preciso - essa parte é removida para exame em um processo comumente conhecido como extração ou corte. Amostras maiores são cortadas para posicionar corretamente suas estruturas anatômicas no cassete. Certos espécimes (especialmente biópsias) podem ser submetidos a pré-inclusão em ágar para garantir a orientação correta do tecido no cassete e, em seguida, no bloco e, em seguida, na lâmina de microscopia diagnóstica. Em seguida, ele é colocado em um cassete de plástico durante a maior parte do resto do processo.

Fixação química

Além da formalina, outros fixadores químicos têm sido usados. Mas, com o advento da coloração por imunohistoquímica (IHC) e testes de patologia molecular diagnóstica nessas amostras, a formalina se tornou o fixador químico padrão na histopatologia diagnóstica humana. Os tempos de fixação para amostras muito pequenas são mais curtos e existem padrões na histopatologia diagnóstica humana.

Em processamento

A água é removida da amostra em estágios sucessivos pelo uso de concentrações crescentes de álcool . O xileno é usado na última fase de desidratação em vez do álcool - isso ocorre porque a cera usada no próximo estágio é solúvel em xileno, onde não está em álcool, permitindo que a cera penetre (se infiltre) na amostra. Este processo é geralmente automatizado e feito durante a noite. A amostra infiltrada com cera é então transferida para um recipiente de inclusão de amostra individual (geralmente de metal). Finalmente, a cera derretida é introduzida ao redor da amostra no recipiente e resfriada para solidificação de modo a embuti-la no bloco de cera. Este processo é necessário para fornecer uma amostra devidamente orientada e robusta o suficiente para a obtenção de seções finas de micrótomo para a lâmina.

Assim que o bloco embutido em cera estiver concluído, seções serão cortadas dele e geralmente colocadas para flutuar em uma superfície de banho de água que espalha a seção. Isso geralmente é feito à mão e é um trabalho especializado (histotecnologista) com a equipe do laboratório fazendo escolhas sobre quais partes da fita de cera do micrótomo de amostra colocar nas lâminas. Em geral, vários slides serão preparados em diferentes níveis ao longo do bloco. Depois disso, a lâmina montada em seção fina é manchada e uma lamínula protetora é montada nela. Para manchas comuns, um processo automático é normalmente usado; mas as manchas raramente usadas costumam ser feitas à mão.

Processamento de seção congelada

O segundo método de processamento histológico é denominado processamento de seção congelada . Este é um método científico altamente técnico realizado por um histocientista treinado. Neste método, o tecido é congelado e cortado em fatias finas usando um micrótomo montado em um dispositivo de refrigeração abaixo do congelamento denominado criostato . As finas seções congeladas são montadas em uma lâmina de vidro, fixadas imediatamente e brevemente em um fixador líquido e tingidas usando técnicas de coloração semelhantes às tradicionais seções embutidas em cera. As vantagens desse método são o tempo de processamento rápido, menos necessidade de equipamento e menos necessidade de ventilação em laboratório. A desvantagem é a baixa qualidade do slide final. É usado em patologia intra-operatória para determinações que podem ajudar na escolha da próxima etapa da cirurgia durante a sessão cirúrgica (por exemplo, para determinar preliminarmente a clareza da margem de ressecção de um tumor durante a cirurgia).

Coloração de lâminas de histologia processadas

Isso pode ser feito para lâminas processadas pela fixação química ou lâminas de seção congelada. Para ver o tecido ao microscópio, as seções são coradas com um ou mais pigmentos . O objetivo da coloração é revelar os componentes celulares; contrastes são usados ​​para fornecer contraste.

A coloração mais comumente usada em histologia é uma combinação de hematoxilina e eosina (freqüentemente abreviada como H&E). A hematoxilina é usada para tingir os núcleos de azul , enquanto a eosina cora o citoplasma e a matriz do tecido conjuntivo extracelular de rosa . Existem centenas de várias outras técnicas que têm sido usadas para corar células seletivamente. Outros compostos usados ​​para colorir seções de tecido incluem safranina , óleo vermelho O , vermelho congo , sais de prata e corantes artificiais. Histoquímica se refere à ciência de usar reações químicas entre produtos químicos de laboratório e componentes dentro do tecido. Uma técnica histoquímica comumente realizada é a reação do azul da Prússia de Perls , usada para demonstrar depósitos de ferro em doenças como a hemocromatose .

Recentemente, os anticorpos têm sido usados ​​para manchar proteínas , lipídios e carboidratos específicos . Chamada de imunohistoquímica , essa técnica aumentou muito a capacidade de identificar especificamente categorias de células ao microscópio. Outras técnicas avançadas incluem a hibridização in situ para identificar moléculas de DNA ou RNA específicas . Esses métodos de coloração de anticorpos geralmente requerem o uso de histologia de seção congelada. Os procedimentos acima também são realizados no laboratório sob escrutínio e precisão por um cientista de laboratório médico especialista treinado (um histocientista). As câmeras digitais são cada vez mais usadas para capturar imagens histopatológicas.

Interpretação

As lâminas histológicas são examinadas ao microscópio por um patologista , um especialista clinicamente qualificado que concluiu um programa de treinamento reconhecido. Este diagnóstico médico é formulado como um relatório de patologia que descreve os achados histológicos e a opinião do patologista. No caso do câncer , isso representa o diagnóstico de tecido necessário para a maioria dos protocolos de tratamento. Na remoção do câncer , o patologista indicará se a margem cirúrgica está desobstruída ou envolvida (o câncer residual é deixado para trás). Isso é feito usando o método de processamento de bread loafing ou CCPDMA . Artefatos visuais microscópicos podem causar diagnósticos incorretos de amostras.

Em infarto do miocárdio

Após um infarto do miocárdio (ataque cardíaco), nenhuma histopatologia é observada nos primeiros ~ 30 minutos. O único sinal possível nas primeiras 4 horas é a ondulação das fibras na borda. Posteriormente, porém, inicia-se uma necrose de coagulação , com edema e hemorragia. Após 12 horas, pode-se observar carioponose e hipereosinofilia dos miócitos com necrose da banda de contração nas margens, bem como início de infiltração neutrofílica. Em 1-3 dias, há necrose de coagulação contínua com perda de núcleos e estriações e um aumento da infiltração de neutrófilos no interstício. Até o final da primeira semana após o infarto ocorre o início da desintegração das fibras musculares mortas, necrose dos neutrófilos e início da remoção dos macrófagos das células mortas na borda, o que aumenta nos dias subseqüentes. Após uma semana também há início da formação de tecido de granulação nas margens, que amadurece no mês seguinte, obtém aumento da deposição de colágeno e diminuição da celularidade até que a cicatriz miocárdica esteja totalmente madura aproximadamente 2 meses após o infarto.

Veja também

Referências

links externos